How to Cite
摘要
Поиск новых мишеней для терапевтического воздействия на метастатическую форму карциномы почки (КП) остается актуальной задачей на сегодняшний день. Одной из таких мишеней может быть протеинфосфатаза DUSP9. О значительном снижении уровня мРНК DUSP9 в клинических образцах КП по сравнению c нормальной тканью впервые сообщили Чебуркин с соавторами в 2002 году [1]. Позднее мы показали, что подавление экспрессии мРНК DUSP9 происходит уже на ранних стадиях заболевания. Мы также показали, что экспрессия гена DUSP9 при КП может регулироваться на эпигенетическом уровне и, кроме того, дифференциально, в зависимости от пола пациента. В последующие годы, онкосупрессорные свойства DUSP9 при КП были подтверждены другими исследователями.
Целью данной работы было изучение влияния экзогенной экспрессии гена DUSP9 на пролиферацию и миграцию клеток КП человека.
Материалы и методы. В работе использовалась DUSP9-негативная линия КП человека ACHN. Трансфекцию клеток проводили сконструированным нами DUSP9-экспрессирующим вектором. Эффективность трансфекции оценивали методами иммунофлуоресценции и вестерн-блота, количество жизнеспособных клеток MTT-тестом, скорость миграции клеток скрэтч-тестом. Внеклеточные везикулы из кондиционной среды выделяли, используя SubXTM технологию, и характеризовали методом анализа траекторий наночастиц и вестерн-блотом.
Результаты. Эффективность трансфекции варьировала от 70% до 90%. Количество жизнеспособных клеток, экспрессирующих DUSP9, и клеток, трансфицированных вектором без вставки, различалась незначительно 48 часов после трансфекции. Экспрессия DUSP9 статистически значимо уменьшала скорость миграции клеток по сравнению с контролем. Белок DUSP9 обнаруживался в экзосомной фракции бессывороточной кондиционной среды от клеток, трансфицированных DUSP9-экспрессирующим вектором.
Выводы. Мы показали, что экзогенная экспрессия DUSP9 замедляет миграцию клеток КП. Результат указывает на то, что одной из возможных ролей DUSP9 в канцерогенезе почки может быть регулирование процесса метастазирования.
参考
Cheburkin YV, Knyazeva TG, Peter S, et al. Molecular portrait of human kidney carcinomas: The cDNA microarray profiling of kinases and phosphatases involved in the cell signaling control. J Mol Biol. 2002;36(3):376–380. doi:10.1023/A:1016059313254.
Muda M, Boschert U, Smith A, et al. Molecular cloning and functional characterization of a novel mitogen-activated protein kinase phosphatase, MKP-4. J Biol Chem. 1997;272(8):5141–51. doi:10.1074/jbc.272.8.5141.
Khoubai FZ, Grosset CF. DUSP9, a dual-specificity phosphatase with a key role in cell biology and human diseases. Int J Mol Sci. 2021;22(21):11538. doi:10.3390/ijms222111538.
Гранов А.М., Якубович Е.И., Евтушенко В.И. Множественный параллельный анализ экспрессии генов как инструмент молекулярной диагностики рака почки и предстательной железы. Медицинский Академический Журнал. 2006;6(1):131–138 [Granov AM, Jakubovich EI, Yevtushenko VI. Multiple parallel gene expression analysis as a tool for molecular diagnosis of renal and prostate cancer. Medical Academic Journal. 2006;6(1):131–138 (In Russ.)].
Zhou L, Chen J, Li Z, et al. Integrated profiling of microRNAs and mRNAs: microRNAs located on Xq27.3 associate with clear cell renal cell carcinoma. Creighton C, editor. PLoS ONE. 2010;5(12):e15224. doi:10.1371/journal.pone.0015224.
Wu S, Wang Y, Sun L, et al. Decreased expression of dual-specificity phosphatase 9 is associated with poor prognosis in clear cell renal cell carcinoma. BMC Cancer. 2011;11(1). doi:10.1186/1471-2407-11-413.
Luo J, Luo X, Liu X, et al. DUSP9 suppresses proliferation and migration of clear cell renal cell carcinoma via the mTOR pathway. OncoTargets Ther. 2020;13:1321–1330. doi:10.2147/OTT.S239407.
Wu F, Lv T, Chen G, et al. Epigenetic silencing of DUSP9 induces the proliferation of human gastric cancer by activating JNK signaling. Oncol Rep. 2015;34:121–128. doi:10.3892/or.2015.3998.
Qiu Z., Liang N., Huang Q. et al. Downregulation of DUSP9 promotes tumor progression and contributes to poor prognosis in human colorectal cancer. Front. Oncol. 2020;10:54701. doi:10.3389/fonc.2020.547011.
Liu Y, Lagowski J, Sundholm A, et al. Microtubule disruption and tumor suppression by mitogen-activated protein kinase phosphatase 4. Cancer Res. 2007;67(22):10711–9. doi:10.1158/0008-5472.CAN-07-1968.
Liu J, Ni W, Xiao M, et al. Decreased expression and prognostic role of mitogen-activated protein kinase phosphatase 4 in hepatocellular carcinoma. J Gastrointest Surg. 2013;17(4):756–65. doi:10.1007/s11605-013-2138-0.
Chen K, Gorgen A, Ding A, et al. Dual-specificity phosphatase 9 regulates cellular proliferation and predicts recurrence after surgery in hepatocellular carcinoma. Hepatol Commun. 2021;5(7):1310–28. doi:10.1002/hep4.1701.
Гранов А.М., Якубович Е.И., Лавникевич Д.М., Евтушенко В.И. Гендерные различия в метилировании 5’-фланкирующей области гена DUSP9 у больных со светлоклеточной карциномой почки. Медицинский академический журнал. 2008;8(3):71–76 [Granov AM, Jakubovich EI, Lavnikevich DM, et al. Gender differences in methylation of 5’region of DUSP9 in clear cell renal cell carcinoma. Medical Academic Journal. 2008;8(3):71–76 (In Russ.)].
Якубович Е.И., Лавникевич Д.М., Евтушенко В.И. Потенциальная роль эпигенетических факторов в инактивации гена DUSP9 при светлоклеточной карциноме почки. Современные исследования социальных проблем (электронный научный журнал). 2013;9:29 [Jakubovich EI, Lavnikevich DM, Yevtushenko VI. Potential role of epigenetic factors in DUSP9 gene inactivation in clear cell renal cell carcinoma. Modern Studies of Social Issues (scientific e-journal). 2013;9:29 (In Russ.)]. doi:10.12731/2218-7405-2013-9-28.
Гранов А.М., Вершинина С.Ф., Якубович Е.И. и др. Антибластомный эффект экспрессионной плазмиды с геном DUSP9 на модели солидной карциномы эрлиха у мышей SHR. Медицинский академический журнал. 2016;16(3):75–81 [Granov AM, Vershinina SF, Jakubovich YeI, et al. The antitumor effect of expression plasmid bearing DUSP9 gene in SHR mice having solid ehrlich carcinoma. Medical Academic Journal. 2016;16(3):75–81 (In Russ.)].
Sylvester PW. Optimization of the tetrazolium dye (MTT) colorimetric assay for cellular growth and viability. Methods Mol Biol. 2011;716:157–168. doi:10.1007/978-1-61779-012-6_9.
Cory G. Scratch-wound assay. Methods Mol Biol. 2011;769:25–30. doi:10.1007/978-1-61779-207-6_2.
Suarez-Arnedo A, Torres Figueroa F, Clavijo C, et al. An image J plugin for the high throughput image analysis of in vitro scratch wound healing assays. Chirico G, editor. PLos One. 2020;15(7): e0232565. doi:10.1371/journal.pone.0232565.
Malykh AG, Malek A, Lokshin A, et al. Abstract 1618: Simultaneous isolation of exosomes and cfDNA from liquid biopsies using universal kit based on SubX-MatrixTM technology. Cancer Res. 2018;78(13_Suppl):1618–1618. doi:10.1158/1538-7445.am2018-1618.
Shtam T, Evtushenko V, Samsonov R, et al. Evaluation of immune and chemical precipitation methods for plasma exosome isolation. Patel GK, ed. PLos One. 2020;15(11): e0242732. doi:10.1371/journal.pone.0242732.
Tenchov R, Sasso JM, Wang X, et al. Exosomes─Nature's lipid nanoparticles, a rising star in drug delivery and diagnostics. ACS Nano. 2022;10. doi:10.1021/acsnano.2c08774.
Jiapaer Z, Li G, Ye D, et al. LincU preserves naive pluripotency by restricting ERK activity in embryonic stem cells. Stem Cell Rep. 2018;11:395–409. doi:10.1016/j.stemcr.2018.06.010.
Lu H, Tran L, Park Y, et al. Reciprocal regulation of DUSP9 and DUSP16 expression by HIF1 controls ERK and P38 MAP kinase activity and mediates chemotherapy-induced breast cancer stem cell enrichment. Cancer Res. 2018;78:4191–4202. doi:10.1158/0008-5472.CAN-18-0270.
This work is licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International License.
© АННМО «Вопросы онкологии», Copyright (c) 2023